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Display this page in English PRECICE® Freshness Kits Version du Kit Format Prix* PRECICE® % IMP (Valeur K) 30 analysis 369.00 € PRECICE® % Hx 30 analyses 369.00 € PRECICE® % IMP & % Hx 20 analyses 499.00 € * Prix HT. Prix mis à jour le 29 novembre 2011. Prix susceptibles de modification sans préavis. Frais de port non inclus. Gamme de Kits PRECICE® Freshness Assay Détermination de la fraîheur du Poisson et des Viandes par dosage rapide des produits de dégradation de l'ATP : IMP (ou Valeur K), Inosine et Hypoxanthine Les produits de dégradation de l'ATP sont des marqueurs reconnus du niveau de fraîcheur des Poissons et des Viandes : par exemple, la teneur en IMP, exprimée en pourcentage de tous les produits de dégradation de l'ATP, est un excellent indicateur d'un haut degré de fraîcheur, tandis que la teneur en hypoxanthine (Hx) indique le début de la dégradation des produits. Les Kits PRECICE® K-Freshness Assay sont les premiers kits enzymatiques qui permettent une mesure directe de l'IMP, de l'Hx et de l'Inosine en utilisant un spectrophotomètre ou un lecteur de plaque. Après une procédure simple d'extraction par ébullition, les extraits sont mis à incuber pendant 1h avec des mélanges enzymatiques qui conduisent à la conversion complète de l'IMP, de l'inosine et de l'hypoxanthine et à la libération de NADH, alors aisément mesurable par mesure d'absorbance à 340nm. Trois versions de Kit PRECICE® Freshness Assay sont disponibles, selon le niveau de fraîcheur à contrôler : mesure de % IMP (Valeur K), mesure de % Hx ou mesure de % IMP et de % Hx. Chaque Kit PRECICE® Freshness Assay : • est un outil rapide, économique pour un contrôle de routine de la fraîcheur, idéal pour remplacer les méthodes chromatographiques (AB, ABVT), • mesure jusqu'à 30 échantillons à la fois (20 pour un dosage d'IMP et de Hx), en 60 min, en utilisant un lecteur de plaque standard, • est très facile d'utilisation (format "add and measure"), • a une haute précision, indépendante de la taille des échantillons (3-4 g suffisent) • présente les résultats de façon très commode, en % d'IMP et/ou d'Hx sur le total des nucléotides issus de la dégradation de l'ATP
Etude de Cas   Contenu du Kit Pour une description détaillée du Kit PRECICE® K-Freshness Assay... En savoir plus sur la Valeur K EGALEMENT DISPONIBLE : Service PRECICE® K-Freshness NOVOCIB peut aussi mesurer, sous forme de prestation de service, la fraîcheur de vos échantillons. N'hésitez pas à nous contacter
Téléchargement : Fiche Produit  Guide d'Utilisation (en Anglais)	Clicuez pour obtenire des informations ou pour passer commande : mesure de % IMP, mesure de % Hx, mesure de % IMP & % Hx
Fraîcheur et produits de dégradation de l'ATP   Etude de cas   Contenu du Kit

Comment les produits de dégradation de l'ATP indiquent-ils le degré de fraîcheur de la chair animale ?
Qu'est-ce que la Valeur K ?
Comment les nucléotides indiquent le niveau de fraicheur de la chair ?
L'ATP (adénosine triphosphate) est le principal vecteur de l'énergie cellulaire. Son contenu est particulièrement important dans les cellules des muscles, où une grande quantité d'ATP est utilisée pour déclencher la contraction musculaire. Dès qu'un animal meurt, la respiration cellulaire s'arrête et il n'y a plus de formation d'ATP. Une fois le stade de rigidité cadavérique (rigor mortis) atteint, entre quelques minutes et quelques heures après l'abattage de l'animal, la réserve d'ATP commence à être progressivement et séquentiellement dégradée selon une succession de réactions, comme l'illustre la figure suivante.

Post-mortem ATP depletion is mainly due to autolytic reactions and controlled by endogenous enzymes, even if the microbial flora, when developed enough, may contribute to the process. A high content of inosine monophosphate (IMP) in the flesh indicates a high level of freshness whereas a high content of hypoxanthine (Hx) indicates that spoilage phase will soon start, if not started yet. Measurement of ATP degradation products is an excellent tool for fish freshness assessment, before the traditional techniques (BA, TVBN) regarding bacterial spoilage become relevant.
La dégradation post-mortem de l'ATP est principalement due à des réactions autolytiques contrôlées par des enzymes endogènes (même si la flore microbienne, lorsqu'elle est suffisamment développée, y contribue aussi). Une haute teneur en inosine monophosphate (IMP) dans la chair indique un haut niveau de fraîcheur, alors qu'une haute teneur en hypoxanthine (Hx) indique un niveau plus avancé d'altération de la chair. La mesure des différents produits de dégradation de l'ATP est un excellent outil de contrôle de la fraîcheur de la chair du poisson, avant même que ne commence la phase de détérioration par les micro-organismes et que les techniques traditionnelles correspondantes ne deviennent alors pertinentes.

Le concept de la Valeur K
A la fin des années 1950, une équipe de chercheurs japonais (Saito et al.) proposa un nouveau concept, baptisé "Valeur K", pour indiquer la fraîcheur de la chair de poisson. La valeur K est fondée sur la dégradation de l'ATP et la formation des produits qui en résulte, à savoir l'adénosine diphosphate (ADP) et monophosphate (AMP), l'inosine monophosphate (IMP), l'inosine (Ino) et, à son ultime étape, l'hypoxanthine (Hx). La valeur K mesure combien la dégradation de l'ATP a progressé dans le tissu. Elle est exprimée comme le pourcentage des deux derniers produits résultant du catabolisme de l'ATP, c'est à dire Ino et Hx, par rapport à l'ATP et à l'ensemble des composés de dégradation de l'ATP : ATP, ADP, AMP, IMP, Ino and Hx.
Or, chez la plupart des animaux, l'ATP se décompose très rapidement en IMP. Une valeur K simplifiée (généralement appelée valeur K_i) a été très tôt proposée par Karube et al. (1984) et est actuellement considérée comme équivalente à l'équation de la valeur K utilisant à 6 paramètres.

K (%) =	Ino + Hx	La valeur K est reconnue depuis plusieurs décennies comme le plus efficace et le plus objectif indicateur de la fraîcheur du poisson et des produits de la mer, ainsi que des viandes (boeuf, porc, agneau et volaille).
	IMP + Ino + Hx

Puisque la teneur en IMP, exprimée en pourcentage des trois produits de dégradation de l'ATP (en l'occurrence l'IMP, l'Ino et l'Hx) est direcetement liée à la formule de la Valeur K (%IMP = 100% - Valeur K), il peut être commode de considérer le % IMP comme un critère de fraîcheur équivalent mais pour lequel plus le % IMP est élevé, plus le poisson est frais.
La valeur K offre un autre avantage sur les autres critères de fraîcheur : son principe repose sur la teneur en différents produits de dégradation de l'ATP. Or, l'IMP), l'Ino et l'Hx sont thermiquement stables, au chauffage ou à la congélation, ce qui signifie que la valeur K peut être mesurée sur des échantillons de poissons frais, surgelés ou même cuits.

(^Top) Pourquoi et à quel moment mesurer la valeur K ?
La fraîcheur est le critère qualité le plus important en matière de poisson et de produits de la mer. Si l'analyse sensorielle permet assez facilement d'évaluer la fraîcheur d'un poisson entier, cru et réfrigéré, le contrôle de la fraîcheur devient vite plus problématique sur les produits transformés.
Les outils actuels de CQ, tels que les dosages d'ABVT, AB ou TMA, sont utilisés en routine mais ils reposent sur les changements biochimiques qui apparaissent lorsque la phase de détérioration est engagée : ils peuvent sont donc pertinents à une étape moyenne ou tardive du process. En revanche, puisque la dégradation de l'ATP est le tout premier phénomène biochimique qui se déclenche à la mort du poisson, bien avant que sa chair ne commence à se détériorer, l'évolution de la valeur K concerne les phases précoces de transformation ou de conservation du poisson et permet aux professionnels d'anticiper le début de la détérioration et de mieux contrôler le niveau d'"Ultra-fraîcheur" du produit.
En d'autres termes, la valeur K et la mesure de % Hx sont des marqueurs de fraîcheur de choix dans les phases précoces du process.
La plupart des chercheurs japonais spécialisés considèrent que le poisson cru peut être mangé en sashimi lorsque la valeur K ne dépasse pas 20%.

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Etude de cas

Les changements des teneurs en produits de dégradation de l'ATP, en l'occurrence l'IMP et l'Hypoxanthine, ont été mesurés en utilisant le Kit PRECICE^® %IMP & %Hx Freshness Assay sur plusieurs échantillons de poisson, conservés sur de la glace depuis l'abattage jusqu'à 10-18 jours, selon les espèces de poissons. ≈ 3g de chair de poisson prise dans le muscle dorsal ont été prélevés et mis à bouillir au bain-marie pendant 20min. Les extraits de poisson ont été récupérés et dilués dans 1 volume d'eau. 4-10µL de l'extrait dilué ont été placés dans 6 puits d'une micro-plaque à 96 puits avant d'ajouter 200µL de tampon de reaction (pour le contrôle "Blank"), de Mix Enzymatique I (pour le dosage d'IMP), de Mix Enzymatique II (pour le dosage d'IMP + Ino + Hx) et de Mix Enzymatique III (pour le dosage d'Hx), le tout en duplicata. Après 1h d'incubation à 37°C, l'absorbance a été mesurée à 340nm avec un lecteur de plaque iEMS Reader MF (Labsystems). Les données d'absorbance ont été utilisées pour déterminer les concentrations en nucléotides. L'évolution des teneurs en IMP et en Hx en fonction du temps de conservation sur glace sont indiquée pour la Truite (Figure A), la Sole (Figure B), le Cabillaud (Figure C) et le Bar (Figure D). IMP et Hx sont exprimés en pourcentage de la teneur totale des produits de dégradation de l'ATP (IMP + Ino + Hx).

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La Valeur K est directement déterminée du %IMP par la formule : Valeur K = 100% - %IMP
(^Top)

Contenu du Kit
Trois différentes versions de Kit PRECICE^® K-Freshness Assay sont disponibles.

	% IMP (Valeur K) 30 analysis	% Hx 30 analyses	% IMP & % Hx 20 analyses
• "Enzyme mix I", lyophilisé, pour dosage d'IMP	V	X	V
• "Enzyme mix II", lyophilisé, pour dosage d'IMP + Ino + Hx	V	V	V
• "Enzyme mix III", lyophilisé, pour dosage d'Hx	X	V	V
• Tampon de réaction    • Tubes contenant les cofacteurs (poudre)    • Une micro-plaque transparente de 96 puits à fonds ronds (Corning, Costar®, ref. 3797)	V	V	V