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Mesure de l'état de fraîcheur des Poissons et Produits de la Mer par la Valeur K En développant son Kit PRECICE® K-Freshness Assay, NOVOCIB est la première société à offrir un système (breveté) fiable, sensible et très facile d'utilisation pour mesurer objectivement, par spectrophotométrie, la fraîcheur de la chair de poisson par détermination de la Valeur K. La préparation des échantillons est très simple et rapide (30mn) et ne nécessite que 3 à 4 grammes de chair de poisson (muscle). Le Kit PRECICE® K-Freshness Assay est idéal pour un contrôle de routine de la fraîcheur du poisson par les professionnels de l'industrie des Produits de la Mer. Délivré sous le format très pratique d'une microplaque de 96 puits, un seul Kit PRECICE® K-Freshness Assay permet la mesure de la valeur K de 32 échantillons de chair de poisson à la fois (ou 16 en duplicata) et en 60 mn. En savoir plus sur la Valeur K
EGALEMENT DISPONIBLE :
Service PRECICE® K-Freshness NOVOCIB peut aussi mesurer, sous forme de prestation de service, la valeur K de vos échantillons. N'hésitez pas à nous contacter |
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Description du Kit
Le Kit PRECICE® K-Freshness Assay est un outil enzymatique qui permet de déterminer facilement le niveau de fraîcheur de la chair animale, en particulier du poisson et des produits de la mer, par mesure spectrophotométrique de la valeur K d'échantillons de chair, sur microplaque standard à 96 puits.
Principe
Le Kit PRECICE® K-Freshness Assay est fondé sur l'utilisation d'enzymes recombinantes originales, impliquées dans le métabolisme des nucléotides, et qui permettent un dosage simple et fiable de l'inosine monophosphate (IMP), de l'inosine (Ino) et de l'hypoxanthine (Hx) par spectrophotométrie (procédé breveté).
Pour chaque échantillon de poisson, les quantités d'IMP et de l'ensemble IMP + Ino + Hx sont mesurées par absorbance à 340nm. La valeur K value est alors facilement calculée à partir des deux mesures d'absorbance obtenues pour l'échantillon (plus une mesure d'absorbance pour le bruit de fond).
Etude de la Sensibilité et de la Linéarité du signal
| Le Kit PRECICE® K-Freshness Assay montre une excellente sensibilité puisque la LID (Limite Inférieure de Détection) et la LIQ (Limite Inférieure de Quantification) sont de 4.5µM et 8.5µM, respectivement.
Ainsi, le Kit PRECICE® K-Freshness Assay permet de détecter une dégradation de l'IMP de 4% seulement (c'est à dire une valeur K de 4%). La corrélation entre l'absorbance mesurée à 340nm et la concentration en IMP, Ino et Hx d'un échantillon a été étudiée à partir d'un extrait de maquereau auquel de l'IMP, de l'Ino ou de l'Hx a été ajoutée à différentes concentrations connues. Les valeurs d'absorbance obtenues ont été corrigées du "blanc" (correspondant à l'extrait de maquereau sans ajout d'IMP, d'Ino ou de Hx). Les résultats montrent que l'absorbance mesurée en utilisant le Kit PRECICE® K-Freshness Assay est très fortement corrélée aux concentrations d'IMP, d'Ino et d'Hx. L'absorbance est linéaire jusqu' à des concentrations de 100µM d'IMP, d'Ino et d'Hx, avec un coefficient de corrélation (ρ) > 0.998. Les figures suivantes montrent la linéarité entre l'absorbance mesurée et la concentration d'IMP (droite), d'Ino (en bas, à gauche) et d'Hx (en bas, à droite). |
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Contenu du Kit : Un Kit PRECICE® K-Freshness Assay standard (une plaque de 96 puits) contient :
• un tube de 15ml contenant un premier mélange d'enzymes, "Enzyme mix I" (orange), lyophilisées, pour le dosage d'IMP
• un tube de 15ml contenant un second mélange d'enzymes, "Enzyme mix II" (bleu), lyophilisées, pour le dosage d'IMP + Ino + Hx
• un tube de 50ml contenant 20ml de tampon de réaction, "Reaction buffer"
• 3 tubes contenant les cofacteurs (poudre)
• une microplaque transparente (96 puits, à fond rond, Corning, Costar®, réf. 3797)
Description résumée de la procédure
Préparation de l'échantillon : L'échantillon de poisson est préparé à partir de 3-4 grammes de chair prélevés dans du muscle et bouillis 30 mn au bain-marie pour inactiver les enzymes endogènes.
5µL du "jus" translucide obtenu (exsudat) sont pipetés dans 3 puits (6 pour un essai en duplicata) de la microplaque afin de mesurer l'absorbance du bruit de fond (Blanc), du contenu en IMP et du contenu en IMP + Ino + Hx.
Préparation du mélange réactionnel : Un tampon de réaction et deux mélanges enzymatiques sont préparés en dissolvant les réactifs et les mélanges lyophilisés d'enzymes (tout est fourni).
Du tampon de réaction est pipeté dans les essais "Blanc", du mélange enzymatique réactionnel I dans les essais pour dosage d'IMP et du mélange enzymatique réactionnel II dans les essais pour dosage d'IMP + Ino + Hx.
Incubation et lecture d'Absorbance : La microplaque est insérée dans le lecteur à 37°C. La lecture d'Absorbance se fait à 340nm après 60mn d'incubation.
Calcul de la Valeur K : Pour chaque échantillon, la valeur K est alors facilement déterminée à partir des 3 valeurs d'absorbance enregistrées : Blanc, IMP et IMP + Ino + Hx.
(^Top)
Téléchargez notre Guide d'Utilisation (en Anglais) 
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